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Elisa實(shí)驗方法操作標(biāo)準(zhǔn)
更新時間:2016-10-25   點(diǎn)擊次數(shù):1216次

Elisa實(shí)驗方法操作標(biāo)準(zhǔn),試劑準(zhǔn)備

在臨床實(shí)驗室,對試劑準(zhǔn)備一般不太注意,通常的做法是,在實(shí)驗時將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題,其直接的后果是對一些弱陽性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測定中試劑的準(zhǔn)備zui為關(guān)鍵的是,在實(shí)驗開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,再進(jìn)行測定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度,以滿足測定要求。其次,目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制,因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。此外,當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時,則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時配制。

Elisa實(shí)驗方法操作標(biāo)準(zhǔn),加血清樣本及反應(yīng)試劑

在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中,血清樣本的加入幾乎是*的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點(diǎn)是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,除了要注意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很容易出現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,這樣就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附,從而引起非特異顯色。所以,有時候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性,下次測定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。

 

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