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ELISA試劑盒途徑的選擇決定于抗原的生物學(xué)特性和理化特性
更新時間:2019-02-15   點擊次數(shù):1531次

    ELISA試劑盒途徑的選擇決定于抗原的生物學(xué)特性和理化特性,如激素、酶、毒素等生物學(xué)活性抗原,通常不宜選用靜脈打針。
不一樣個別對共同抗原的反應(yīng)性不一樣,而且不一樣抗原發(fā)作免疫反應(yīng)的能力也有強有弱,因此常常在打針抗原的一起,參與能增強抗原的抗原性物質(zhì),以影響機體發(fā)作較強的免疫反應(yīng),這種物質(zhì)稱為免疫佐劑。
   免疫前取等容積*或不*佐劑與免疫原溶液混合,用振蕩器混勻成乳狀,也可以在免疫前取需求量佐劑置乳缽中研磨,均勻后再邊磨邊滴參與等容積抗原液(其中加卡介苗3~4mg/ml或不加),加完后再繼承研磨成乳劑,滴于冰水上5~10min內(nèi)*不分散停止。
交叉反應(yīng)率低,標(biāo)明抗血清的特異性好,反之則特異性差。
收集的血液置于室溫下1h支配,凝聚后,置4℃下,過夜(切勿冰凍)分出血清,離心,4000rpm,10min。
     取兔血有兩種方法,一是耳緣靜脈或耳動脈放血,二是頸動脈入血,也可心臟采血。加強免疫時用不*佐劑,初度免疫時皮下打針百日咳疫苗0.5ml,加強免疫時不必打針百日咳疫苗。
在無菌條件,吸出血清,分裝(0.05~0.2ml),貯于-40℃以下冰箱,或凍干后儲存。
取動脈或靜脈放血時,將兔放入一個特造的木匣或籠內(nèi),耳露于箱(籠)外,也可由另一人捉住兔身。
    避免丟掉抗原,亦可用一打針器裝抗原液,另一打針器裝佐劑,二者以聚乙烯塑料管聯(lián)接,然后二者往復(fù)重復(fù)抽吸,約數(shù)十分鐘后即能*乳化。
每2~3周加強免疫一次。
制作方法:按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內(nèi),用超聲波使之混勻,高壓滅菌,置4℃下保留備用。
ELISA試劑盒特異性是以交叉反應(yīng)率來標(biāo)明的。
交叉反應(yīng)率通常是用比賽抑制曲線來判定的。
若用兔,用純種新西蘭兔,一組三只,兔的體重以2~3kg為宜。
家兔是zui常用以發(fā)作抗體的動物,因此這兒首要談?wù)撏醚氖占?br />頸動脈放血時,將兔仰臥,固定于兔臺,剪去頸部的毛,切開皮膚,顯露頸動脈,插管,放血。
不一樣濃度的抗原和近似抗原物質(zhì)分別做比賽抑制曲線,計算各自的聯(lián)絡(luò)率(B/T或B/B0),求出各清閑IC50時的濃度,按下列公式計算交叉反應(yīng)率。二禮拜后,可在另一耳放血。
此法可重復(fù)屢次放血。
作免疫用的動物有哺乳類和禽類,首要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等,實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。
在第2次加強免疫后2周,從耳緣靜脈取2~3ml血,制備血清,檢查抗體效價。羊等較大動物以頸靜脈、動脈取血,鼠等小動物取血可參看有關(guān)材料。
剪去耳緣的毛,用少數(shù)二甲苯涂改耳廓,30s后,耳血管擴大、充血。用手輕拉耳尖,以單面剃須刀或尖的手術(shù)刀片,敏捷切開動脈或靜脈,血液即流出,每次可收集30~40ml。
抗原劑量,初度劑量為300~500μg,加強免疫的劑量約為初度劑量為1/4支配。
C冰箱保留。檢查合格后即以其中一打針器作打針用。
佐劑除了延伸抗原在體內(nèi)的存留時間,添加抗原影響效果外,更首要的是,它能影響網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng),使介入免疫反應(yīng)的免疫活性細(xì)胞增多,推進T細(xì)胞與B細(xì)胞的相互效果,然后增強機體對抗原的細(xì)胞免疫和抗體的發(fā)作。
ELISA試劑盒未抵達(dá)預(yù)期效價,需再進行加強免疫,直到滿足時停止。

 

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