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小鼠小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白競爭法的簡要操作步驟
更新時(shí)間:2020-07-15   點(diǎn)擊次數(shù):1040次

 小鼠小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白簡化的程序列表如下:
1、將一級抗體(未標(biāo)記)與樣品抗原一起孵育。
2、將抗體、抗原復(fù)合物添加到預(yù)先用相同抗原包被的96孔板中。
3、 通過洗滌板除去未結(jié)合的抗體。(樣品中的抗原越多,與孔中的抗原結(jié)合的抗體越少,因此稱為“競爭”。)
4、添加對一抗具有特異性并與酶偶聯(lián)的二抗。小鼠小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白(AFP-L2) ELISA kit生物研究中心 
5、添加底物,剩余的酶引發(fā)發(fā)色或熒光信號。
6、對于競爭性ELISA,樣品抗原濃度越高,終信號越弱。
競爭性ELISA的主要事件是由原始抗原(樣品抗原)和添加抗原執(zhí)行的競爭性結(jié)合過程。與間接ELISA,三明治式ELISA和直接ELISA相比,競爭性ELISA的程序在某些方面有所不同。競爭法的簡要操作步驟:
1)先加入特異性抗原,使抗原固定結(jié)合于載體表面;
2)加入梯度濃度比例的待測樣品與酶標(biāo)抗體混合物,并做只加酶標(biāo)抗體的對照組;
3)加入酶促反應(yīng)底物,發(fā)生顯色反應(yīng),對比實(shí)驗(yàn)組及對照組的顯色差異,計(jì)算未知抗體的量。

 

 

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