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紫河車LAMP鑒定試劑盒使用方法
更新時(shí)間:2023-07-25   點(diǎn)擊次數(shù):524次

紫河車LAMP鑒定試劑盒使用方法:

一、樣品采集:

1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。

2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。

3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)

1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對(duì)照。

2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。

4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。

6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。

注:上述樣品建議經(jīng)過增菌后,收集培養(yǎng)物用于檢測(cè)。?

二、DNA提?。?/p>

可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液,按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購(gòu)上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品,并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。

1、液體培養(yǎng)物:取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中,8000rpm離心3min,盡量吸棄上清,加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

2、固體培養(yǎng)物:挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

3、糞便樣品:挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中,加入0.5mL生理鹽水,振蕩混勻,13000rpm離心3分鐘,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

4、其他液體標(biāo)本:取標(biāo)本2-3mL,13000rpm離心3min,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

注:陽性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對(duì)照濃度較高,建議在樣品制備區(qū)域加入陽性對(duì)照。?

ANGL2血管生成素樣蛋白2抗體

Angiopoietin 4血管生成素3/血管生成素4抗體

Annexin I膜粘連蛋白 I抗體

Annexin A2膜粘連蛋白 Ⅱ抗體

ATF1活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體

Aquaporin 4 水通道蛋白4抗體

ATF2活化復(fù)制因子2抗體

AMPK beta 1腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體

Amylin糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體

Angiotensin II血管緊張素Ⅱ抗體

AT2R血管緊張素Ⅱ受體1抗體

Angiopoietin-1血管生成素-1抗體

Annexin V膜粘連蛋白5抗體

Annexin V重組膜粘連蛋白5抗體

alpha Adaptin銜接蛋白α-Adaptin抗體

APAF1凋亡蛋白活性因子-1抗體

APAF1凋亡蛋白活性因子-1抗體

ABCG2三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體

APOE載脂蛋白E抗體

Amyloid Precursor Protein淀粉樣肽前體蛋白抗體

Aquaporin 2水通道蛋白-2抗體

AGT血管緊張素原抗體

Androgen receptor雄激素受體抗體


 

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