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豚鼠T淋巴細(xì)胞的測(cè)定
更新時(shí)間:2012-02-14   點(diǎn)擊次數(shù):1445次

玫瑰花環(huán)試驗(yàn),又稱為花結(jié)試驗(yàn)。是測(cè)定淋巴細(xì)胞數(shù)量和功能的一種方法。
人類T和B淋巴細(xì)胞表面具有不同的受體。由于人類T淋巴細(xì)胞表面具有與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合的受體,能與綿羊紅細(xì)胞非特異性結(jié)合,形成E花環(huán),因此,T細(xì)胞也成為紅細(xì)胞花瓣形成細(xì)胞。根據(jù)E—玫瑰花環(huán)形成率,可以間接判斷機(jī)體細(xì)胞免疫力。目前,已廣泛應(yīng)用于臨床,作為測(cè)定人群免疫狀態(tài)的一個(gè)指標(biāo)。
材料:
1.肝素(100單位/毫升)
2.0.5%兔紅細(xì)胞懸液(用Hanks液配制)
3.吸收過的胎牛血清:
取經(jīng)56℃30分鐘加熱滅活后的胎牛血清加半量壓積兔紅細(xì)胞混合后,37℃水浴20分鐘,2000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,取上清液即成。
4.Hanks液
5.豚鼠抗凝血
6.淋巴細(xì)胞分層液
7.滅菌注射器,針頭,試管,吸管等。
方法:
1.淋巴細(xì)胞提取
(1)取豚鼠抗凝血2毫升,加3毫升Hanks液使之稀釋。加于3毫升淋巴細(xì)胞分層液液面之上。
(2)2000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘,吸淋巴細(xì)胞層到另一試管中加5倍體積的Hanks液洗1—2次,(1500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘)棄上清即成。
1. 加吸收過的胎牛血清0.1毫升,0.5%兔紅細(xì)胞懸液0.2毫升,于淋巴細(xì)胞中。混合后,37℃水浴5分鐘。
2. 500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘,放4℃冰箱中2小時(shí)后,棄大部分上清。
3. 染色及觀察輕輕懸浮沉積的細(xì)胞。向懸液中滴一滴美蘭液,混合,10分鐘后取一滴放載玻片上,加蓋玻片鏡檢。高倍鏡或油鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞,凡結(jié)合3個(gè)或3個(gè)以上的兔紅細(xì)胞者為陽性,計(jì)算花環(huán)形成細(xì)胞的百分率。
 

 

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