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ELISA試劑盒洗板方法和工作原理分析
更新時間:2014-07-15   點擊次數(shù):993次

ELISA試劑盒洗板方法和工作原理分析

ELISA檢測試劑盒洗板方法有以下兩點。

    1.  手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次。

    2.  自動洗板:如果有自動洗板機,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。待檢樣本:體液、血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、尿液、組織勻漿、心房水標本等

    ELISA試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù),用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。

   ELISA檢測試劑盒將樣品或標準品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗體,這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結(jié)合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。

   然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結(jié)合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會與*次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,ELISA試劑盒洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應(yīng),ELISA檢測試劑盒只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復合物的孔才會發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng),ELISA試劑盒并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。

 

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