免费人妻精品一区二区三区,精品人妻一区二区三区浪潮在线,最近中文版字幕2019日本,亚洲一久久久久久久久

技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 培養(yǎng)基與您分享293細(xì)胞的特性和實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)
培養(yǎng)基與您分享293細(xì)胞的特性和實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)
更新時(shí)間:2014-07-22   點(diǎn)擊次數(shù):762次

培養(yǎng)基與您分享293細(xì)胞的特性和實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)

293細(xì)胞培養(yǎng)基的特性:

    1、293細(xì)胞培養(yǎng)基明顯適應(yīng)酸性環(huán)境,pH值在6.9~7.1時(shí),可順利貼壁生長(zhǎng), 換液時(shí)動(dòng)作要輕。一般用高糖的DMEM培養(yǎng)基。

  2、傳代:倒去廢液,PBS洗一次(輕),用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化,生長(zhǎng)良好細(xì)胞,培養(yǎng)瓶中輕搖,使之流遍所有細(xì)胞表面,即將其吸除或棄去消化30s,然后吸去,再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀察細(xì)胞變圓,就可加DMEM終止消化,反復(fù)吹打至細(xì)胞全成單個(gè)懸浮細(xì)胞即可。12小時(shí)-24小時(shí)90%以上細(xì)胞貼壁。293細(xì)胞傳代時(shí)機(jī)為達(dá)80-90%匯合,傳代比例為1:3。

  3、293細(xì)胞培養(yǎng)基在低代時(shí)容易貼壁,生長(zhǎng)良好,在傳到幾十代以后,易聚集成團(tuán),且貼壁不牢,用PBS沖洗時(shí)即可能脫落,即使消化后也不容易吹打成單細(xì)胞懸液,購(gòu)入時(shí)先大量?jī)龃妗?/p>

  4、復(fù)蘇293細(xì)胞的另一生長(zhǎng)特性是貼壁所需時(shí)間長(zhǎng)且貼壁不牢。細(xì)胞冷凍后復(fù)蘇時(shí),都有不同程度的腫脹,若以50ml培養(yǎng)瓶待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底的70%~80%時(shí)消化凍存,復(fù)蘇時(shí)將其全部接種至2個(gè)50ml瓶中時(shí)較為合適。剛復(fù)蘇的293貼壁很慢,復(fù)蘇接種后24小時(shí)內(nèi),應(yīng)盡量減少觀察細(xì)胞次數(shù)或不作觀察,以免因晃動(dòng)而影響細(xì)胞貼壁。復(fù)蘇后48小時(shí)左右觀察貼壁情況并進(jìn)行更換培養(yǎng)基比較合適,如果用一次性塑料培養(yǎng)瓶可增加細(xì)胞貼壁牢度。換液前宜將培養(yǎng)基預(yù)熱。

  5、轉(zhuǎn)染:體外應(yīng)用293細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí),如果是采用磷酸鈣轉(zhuǎn)染,一定要注意293細(xì)胞不要全部長(zhǎng)滿細(xì)胞培養(yǎng)盤,長(zhǎng)滿細(xì)胞時(shí)加入磷酸鈣就會(huì)使293細(xì)胞大片的脫落,是當(dāng)293生長(zhǎng)到1/2或2/3時(shí)進(jìn)行磷酸鈣轉(zhuǎn)染,可以避免細(xì)胞的大量脫落。 

實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)分享:

    1、用大瓶培養(yǎng)較小瓶要好,可能是更有利于293均勻的分布,利于營(yíng)養(yǎng)的攝取

  2、培養(yǎng)液要新鮮,每次只配1000ml,分為2-4瓶,不用的培養(yǎng)基液,凍存在-20度,

  3、要及時(shí)傳代,是細(xì)胞基本鋪滿培養(yǎng)瓶底部,但是細(xì)胞之間還沒有*貼緊,總是多少有空隙的時(shí)候。

  4、如果細(xì)胞貼壁不好,可能是消化過久,或是培養(yǎng)瓶不夠干凈,當(dāng)然要除外細(xì)胞污染。

  5、如果使用用玻璃培養(yǎng)瓶或皿,可以采用高壓滅菌的0.2%明膠溶液預(yù)處理培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿,方法是將明膠加入培養(yǎng)皿,使之浸泡到底面的各個(gè)部分,然后吸出,置超凈臺(tái)內(nèi)晾干即可使用。這樣處理后細(xì)胞貼壁效果好且鏡下細(xì)胞立體感強(qiáng)。如果是新的塑料培養(yǎng)基瓶就不用處理。

 

化工儀器網(wǎng)

推薦收藏該企業(yè)網(wǎng)站
成人h视频在线观看| 久久亚洲AV无码精品色午夜麻豆| 日本孕妇大胆孕交无码| 久久久久久国产精品免费无码| 国产99在线 | 亚洲| 亚洲国产精品成人麻豆| 亚洲av无码av日韩av网站| 特级毛片a级毛片100免费播放| 999热线在线观看| 国产精品久久久久无码av| 亚洲va中文字幕| 久久久久亚洲精品男人的天堂| 茄子视频app色版 永久免费| 在线日本v二区不卡| 五月丁香综合激情六月久久| 国产中年熟女高潮大集合| 免费a级毛片无码专区| 无码天堂亚洲国产av久久| 亚洲人成色7777在线观看| 人人妻人人爽日日人人| 国产日产欧产美| 国产一起色一起爱| 亚洲日韩精品无码专区| 久久久久亚洲av无码a片| 日韩精品无码区免费专区| 国产精品刮毛| 少妇疯狂迎合欲仙欲死| 国产小受呻吟GV视频在线观看| 久久精品国产亚洲av麻豆图片| A级毛片成人网站免费看| 一女被多男玩喷潮视频| 精品久久久久久无码国产| 亚洲AV乱码中文一区二区三区| 无码人妻久久一区二区三区免费丨 | 亚洲精品无码久久一线| 自拍偷在线精品自拍偷无码专区| 99精品热这里只有精品| 国内精品一区二区三区亚洲熟女乱综合一区二区| 国产精品无码无卡毛片不卡视| 日本无码黄动漫在线观看| 一二三四免费观看在线视频中文版 |