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培養(yǎng)基細胞實驗需要的環(huán)境和用到的器皿
更新時間:2014-07-23   點擊次數(shù):1111次

培養(yǎng)基細胞實驗需要的環(huán)境和用到的器皿

培養(yǎng)基細胞在體外培養(yǎng)中所需的條件與體內細胞基本相同。

  1、無污染環(huán)境

  培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。當細胞放置于體外培養(yǎng)時,與體內相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力,一旦被污染或自身代謝物質積累等,可導致細胞死亡。因此在進行培養(yǎng)中,保持細胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時清除等,是維持細胞生存的基本條件。

  2、恒定的溫度

  維持培養(yǎng)基細胞旺盛生長,必須有恒定適宜的溫度。人體細胞培養(yǎng)的標準溫度為36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細胞的正常代謝會受到影響,甚至死亡。培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力較對高溫強,溫度上升不超過39℃時,細胞代謝與溫度成正比;人體細胞在39-40℃1小時,即能受到一定損傷,但仍有可能恢復;在40-41℃1小時,細胞會普遍受到損傷,僅小半數(shù)有可能恢復;41-42℃1小時,細胞受到嚴重損傷,大部分細胞死亡,個別細胞仍有恢復可能;當溫度在43℃以上1小時,細胞全部死亡。

  3、氣體環(huán)境

  氣體是人體細胞培養(yǎng)基生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán),產生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。

  二氧化碳既是細胞代謝產物,也是細胞生長繁殖所需成分,它在細胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的PH值。大多數(shù)細胞的適宜PH為7.2-7.4,偏離這一范圍對細胞培養(yǎng)將產生有害的影響。但細胞耐酸性比耐堿性大一些,在偏酸環(huán)境中更利于細胞生長。有資料顯示,原代羊水細胞培養(yǎng)PH6.8時zui適。

  細胞培養(yǎng)液PH濃度的調節(jié)zui常用的為加NaHCO3的方法,因為NaHCO3可供CO2,但二氧易于逸出,故zui適用于封閉培養(yǎng),而輕乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)因其對細胞無毒性,也起緩沖作用,有防止PH迅速變動的特性而用于開放細胞培養(yǎng)技術中,其zui大優(yōu)點是在開放式培養(yǎng)或細胞觀察時能維持較恒定的PH值。

    細胞培養(yǎng)基以玻璃器皿為主,常準備zui需是使用zui的三倍。器皿應選擇透明度好、無毒、中性硬度玻璃制品。常用的玻璃器皿有下面幾種。

 ?。?)液體儲存瓶:用于儲存各種配制好的培養(yǎng)液、血清等液體,常以500ml、250ml、100ml生理鹽水瓶或血漿瓶代替。

 ?。?)培養(yǎng)瓶:根據(jù)培養(yǎng)細胞種類要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異,用于細胞傳代培養(yǎng)的細胞要求瓶壁厚簿均勻,便于細胞貼壁生長和觀察,瓶口要大小一致,口徑一般不小于1cm,允許吸管伸入瓶內任何部位,規(guī)格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml等幾種。用于外周血培養(yǎng)的常用10ml普通圓瓶。兩種培養(yǎng)瓶均要求選用玻璃制成。

 ?。?)培養(yǎng)基皿:用于開放式培養(yǎng)及其它用途。分直徑30mm、60mm、120mm等幾種。

 ?。?)吸管:常用的有長吸管和短吸管兩類,長吸管也稱刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度稱改良吸管,刻度吸管用于移動液體。常用1ml和10ml兩種。短吸管也叫滴管,分彎頭和直頭兩種。

 ?。?)離心管:離心管是細胞培養(yǎng)中使用zui廣泛的器皿,根據(jù)用途不同形態(tài)各樣,常用于細胞培養(yǎng)的離心管有大腹式尖底離心管和普通尖底離心管兩類。前者分別為50ml、30ml、15ml;后者則多為10ml和5ml。

 ?。?)其它:如三角燒瓶、燒杯、量筒、漏斗、注射器等。

 

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