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ELISA試劑盒制備如何標(biāo)準(zhǔn)化
更新時間:2015-05-19   點(diǎn)擊次數(shù):656次

在實(shí)驗(yàn)條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下,這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的A值后,計算S/N值。也有寫作P/N的,這里的P不代表陽性(positive),而是?。╬atient)的縮寫,不應(yīng)誤解。為避免混淆,更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA試劑盒中,有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)多為各種測定所沿用。

    實(shí)際上每一測定系統(tǒng)應(yīng)該用實(shí)驗(yàn)求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)注意的是,N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。陽性判定值(cut-off value)一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù),以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。ELISA試劑盒用此法判斷結(jié)果要求實(shí)驗(yàn)條件十分恒定,陽性和陰性的對照品應(yīng)符合一定的規(guī)格,須配用精密的儀器,并嚴(yán)格按規(guī)定操作。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)檢測而得到的。

    現(xiàn)舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例。ELISA試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿,陽性對照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml。每次試驗(yàn)設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后,先計算陰性對照A值的平均數(shù)(NCX)和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX),兩個平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個特定的數(shù)值(例0.400),試驗(yàn)才有效。3個陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX,并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范圍,則棄去,而已另兩個陰性對照重新計算NCX;如有兩個陰性對照A值超出以上范圍,則該次實(shí)驗(yàn)無效。

 

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