免费人妻精品一区二区三区,精品人妻一区二区三区浪潮在线,最近中文版字幕2019日本,亚洲一久久久久久久久

技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 雙抗體夾心法檢測(cè)抗原實(shí)驗(yàn)步驟
雙抗體夾心法檢測(cè)抗原實(shí)驗(yàn)步驟
更新時(shí)間:2015-11-20   點(diǎn)擊次數(shù):2578次

雙抗體夾心法檢測(cè)抗原

    雙抗體夾心法用于檢測(cè)抗原。它是利用待測(cè)抗原上的兩個(gè)抗原決定簇A和B分別與固相載體上的抗體A和酶標(biāo)記抗體B結(jié)合,形成抗體A-待測(cè)抗原-酶標(biāo)抗體B復(fù)合物,復(fù)合物的形成量與待測(cè)抗原含量成正比。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.用包被液稀釋包被抗體至合適濃度,包被酶聯(lián)板,每孔100μL。也可37℃,2小時(shí)包被,但此方法不建議使用。包被抗體即可以是單抗,也可以是多抗。但抗體的包被濃度應(yīng)當(dāng)通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定。包被的板條可以在4℃保存數(shù)月。

2.每孔加入100ul洗滌緩沖液,清洗酶聯(lián)板3-5次。

3.10%小牛血清封閉,每孔200μL,濕盒中37℃封閉1小時(shí)。也可以用1.5%酪蛋白或者0.25%的BSA封閉。

4.每孔加入100ul洗滌緩沖液,清洗酶聯(lián)板3-5次。zui后一次在吸水紙上扣干。

5.加標(biāo)準(zhǔn)樣品及樣本。

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線:用1×PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品分別至1000ng/ml、500ng/ml、250 ng/ml、125 ng/ml、62.5 ng/ml、31.25 ng/ml、15.625 ng/ml、7.18 ng/ml。

(2)待測(cè)樣品:用1×PBS稀釋?zhuān)ú煌瑯悠返南♂尡稊?shù)不同,一般稀釋原則為稀釋后的樣品濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線之內(nèi))。

(3)以上下做平行孔,前兩孔作空白加入1×PBS,其余依次加入標(biāo)準(zhǔn)曲線、待測(cè)樣品。加入體積每孔100ul。濕盒中37℃反應(yīng)1小時(shí)。

抗原抗體反應(yīng)比較快,一般1~2小時(shí)就達(dá)到峰值。延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間容易出現(xiàn)非特異結(jié)合。

6.每孔加入100ul洗滌緩沖液,清洗酶聯(lián)板3-5次。zui后一次在吸水紙上扣干。

7.加酶標(biāo)二抗,根據(jù)抗體使用說(shuō)明用1×PBS稀釋?zhuān)靠?00ul濕盒中室溫反應(yīng)40分鐘。

二抗的使用濃度應(yīng)當(dāng)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)確定,二抗的反應(yīng)時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng),容易出現(xiàn)非特異反應(yīng)。

8.每孔加入100ul洗滌緩沖液,清洗酶聯(lián)板3-5次。zui后一次在吸水紙上扣干。

9.加底物顯色液:稱(chēng)取OPD(鄰苯二胺)4mg用10ml底物緩沖液充分溶解,加入15ul H202每孔100ul閉光反應(yīng)5分鐘。OPD要充分溶解,否則容易出現(xiàn)個(gè)別孔顏色太深。

10.終止液終止反應(yīng)每孔100ul終止液。

11.酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀492nm讀數(shù)。

12.以測(cè)定的OD值繪制線性回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線,以標(biāo)準(zhǔn)品蛋白濃度LN值為橫坐標(biāo),相應(yīng)的OD值為縱坐標(biāo),繪制出一條標(biāo)準(zhǔn)曲線并添加線性回歸趨勢(shì)線,其相關(guān)系數(shù)R2應(yīng)大于0.95,根據(jù)方程計(jì)算出樣品中的目標(biāo)蛋白含量。抗體

 

化工儀器網(wǎng)

推薦收藏該企業(yè)網(wǎng)站
卡一卡2卡3卡精品网站| 色狠狠一区二区三区香蕉| 波多野结衣一区二区三区av高清 | 国产成A人亚洲精V品久久网| 久久免费的精品国产V∧| 亚洲国产综合久久久精品| 暗呦交小u女国产精品视频| 最近免费中文字幕中文高清6| 人妻少妇精品专区性色av| 精品熟女碰碰人人a久久| 国产另类ts人妖一区二区| 亚洲欧美一区二区三区在线| 中文WWW新版资源在线| 成人国内精品久久久久影院| 果冻传媒av毛片无码蜜桃| 久久婷婷五月综合97色一本一本| 精品无人区无码乱码av片国产| 国产一区二区三区精品| 精品少妇ay一区二区三区| 成在人线av无码免费| 少妇人妻无码专区视频| 国产乱人伦偷精品视频不卡| 国产亚洲精品麻豆一区二区| 中国chain同志gay片国产| 亚洲国色天香卡2卡3卡4| 人体内射精一区二区三区| 性色av无码| 末成年女a片一区二区| AV无码人妻一区二区三区牛牛| 国产AV无码专区亚洲AV麻豆| 无码人妻久久一区二区三区app| 日本真人做人爱120分钟| 亚洲色欲综合一区二区三区| 大肉大捧一进一出好爽视频| 老司机午夜私人影院免费| 亚洲AV无码国产精品久久| 国内精品无码一区二区三区| 国产精品 精品国内自产拍| 亚洲处破女 WWW| 日本做受高潮好舒服视频| 成人做爰a片免费视频|