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膠原酶消化法
更新時間:2016-04-20   點(diǎn)擊次數(shù):1547次

   膠原酶是一種從細(xì)菌中提取出來的酶,對膠原有很強(qiáng)的消化作用。適于消化纖維性組織、上皮組織以及癌組織,它對細(xì)胞間質(zhì)有較好的消化作用,對細(xì)胞本身影響不大,可使細(xì)胞與膠原成分脫離而不受傷害。該酶分離效果好,即使有鈣、鎂離子存在仍有活性,故可用 PBS 和含血清的培養(yǎng)液配制,即操作簡便又可提高細(xì)胞成活率,zui終濃度 200u/mL 或 0.1~0.3mg/mL. 此酶消化作用緩和,無需機(jī)械振蕩,但膠原酶價格較高,大量使用將增加實驗成本。

  經(jīng)過膠原酶消化后的上皮組織,由于上皮細(xì)胞對酶有耐受性,可能有一些上皮細(xì)胞團(tuán)塊尚未被*消化開。成小團(tuán)塊的上皮細(xì)胞比分散的單個上皮細(xì)胞更易生長,因此不必要再進(jìn)一步消化處理。

   鑒于胰蛋白酶和膠原酶的生物學(xué)活性(見表 4-1)和在不同濃度下消化各種組織小塊所需的時間(小  時)有差異(見表 4-2),以及兩者價格不等,有人采用膠原酶與胰蛋白酶并用,同時還可加透明質(zhì)酸酶(對細(xì)胞表面糖基有作用),采用兩者的聯(lián)合消化作用,對分散大鼠和兔肝、癌組織非常有效。

 

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