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兔環(huán)磷酸腺苷ELISA試劑盒

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兔環(huán)磷酸腺苷 cAMP ELISA試劑盒 Rabbit cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA試劑盒

更新時(shí)間:2024-08-17;廠商性質(zhì):經(jīng)銷商;覽量:692

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  (二) 用于標(biāo)記的酶 用于標(biāo)記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩(wěn)定;反應(yīng)產(chǎn)物易于顯現(xiàn);能商品化。目前應(yīng)用較多的有辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP應(yīng)用zui廣。   1.辣根過氧化物酶(HRP) 過氧化物酶廣泛分布于植物中,辣根中含量zui高,從辣根中提取的稱辣根過氧化物酶(HRP),是由無色酶蛋白和深棕色的鐵卟啉構(gòu)成的一種糖蛋白(含糖量18%),分子量約40 000,約由300個(gè)氨基酸組成,等電點(diǎn)為pH 3-9,催化反應(yīng)的zui適pH值因供氫體不同而稍有差異,一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%飽和度以下的硫酸銨溶液。酶蛋白和輔基的zui大吸收光譜分別為275nm和403nm。   酶的純度以RZ表示:RZ=OD403/OD275   純酶的RZ多在3.0以上,zui高為3.4。RZ在0.6以下的酶制品為粗酶,非酶蛋白約占 75%,不能用于標(biāo)記。RZ在2.5以上者方可用于標(biāo)記。HRP的作用底物為過氧化氫,催化反應(yīng)時(shí)的供氫體有幾種:(1)鄰苯二胺(OPD),產(chǎn)物為橙色,可溶性,敏感性高,zui大吸收值在490nm,可用肉眼觀察判別,容易被濃硫酸終止反應(yīng),顏色可在數(shù)小時(shí)內(nèi)不改變,是目前國內(nèi)ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),酶聯(lián)免疫試劑盒)中zui常用的一種;(2)聯(lián)大茴香胺(OD),產(chǎn)物為橘黃色,zui大吸收值在400nm,顏色較穩(wěn)定;(3)5-氨基水楊酸(5-AS):產(chǎn)物為深棕色,zui大吸收值在449nm,部分溶解,敏感性較差;(4)鄰聯(lián)甲苯胺(OT)產(chǎn)物為藍(lán)色,zui大吸收值在630nm,部分溶解,不穩(wěn)定,不耐酸,但反應(yīng)快,顏色明顯。   2.堿性磷酸酶 系從小牛腸粘膜和大腸桿菌中提取,由多個(gè)同功酶組成。它們的底物種類很多,常用者為硝基苯磷酸鹽,廉價(jià)無毒性。酶解產(chǎn)物呈黃色,可溶,zui大吸收值在400nm。酶的活性以在pH10反應(yīng)系統(tǒng)中,37℃1分鐘水解1μg磷酸苯二鈉為一個(gè)單位。  

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